Patologia Veterinária

O Ácido Periódico de Schiff (PAS) é utilizado na rotina para identificação de substâncias formadas por carboidratos (glicogênio, manose, frutose, glicose, galactose) corando estruturas como membrana basal e microrganismos. No caso de fungos cora os polissacarídeos da parede celular. O que ocorre é a oxidação seletiva de glicois vicinais presentes na glicose que produz aldeídos, estes por fim, reagem com o reagente de Schiff produzindo uma substância de cor magenta. A coloração pode ser feita com ou sem o uso da diástase. A diástase nada mais é que a adição da saliva do operador na lâmina e sua colocação em uma estufa por alguns minutos antecedendo a técnica de coloração. A utilização da diástase serve para confirmar a existência de material PAS-positivo. Na rotina do LABOPAVE essa coloração é principalmente utilizada para identificação de fungos, onde é possível visualizar suas hifas, e tumores de glândulas produtores de mucinas.

The Periodic  Acid-Schiff Stain is used on the routine to identify substances formed by carbohydrates like structures (glycogen, mannose, fructose, glucose, galactose) as the basement membrane and microorganisms. In fungi, stains the polysaccharide components of the fungal cell wall. What occurs is the selective oxidation of vicinal glycols present in the glucose that produces aldehydes, which ultimately react with Schiff’s reagent to produce a magenta colored substance. Staining can be done with or without the use of diastasis. Diastasis is nothing more than adding the operator’s saliva to the slide and placing it in a greenhouse for a few minutes prior to the staining technique. The use of diastasis serves to confirm the existence of PAS-positive materialAt the LABOPAVE this stain is mainly used to identify fungi, where it is possible to see the hyphae, and in tumors of mucin-producing glands.

Photos:

2 and 3- Small intestine, signet ring cell adenocarcinoma, canine, male, SRD, 13 years 9 months, HE. Lump in the intestine wall with large amounts of epithelial cells arranged in acini. In the midst of neoplastic cells, there are extensive areas of connective tissue proliferation (fibroplasia).

4- Small intestine, signet ring cell adenocarcinoma, canine, male, SRD, 13 years 9 months, HE. Observe the acini with epithelial cells containing intense pleomorphism, vesicular nuclei with evident nucleolus, ranging from elongated polygons with sparse and eosinophilic cytoplasm, many with large vacuoles that move the nucleus to the periphery (signet cell, red arrow).

5 and 6- Small intestine, signet ring cell adenocarcinoma, canine, male, SRD, 13 years 9 months, PAS. In the midst of the neoplasm there are acinos that contain cellular debris interspersed with amorphous material with eosinophilic and other slightly basophilic areas, positive in the coloring of PAS (mucins).

7- Small intestine, canine, male, SRD, 13 years and 9 months, SBP. Part of the organ not affected by the neoplasm, showing villi with goblet cells strongly marked by PAS due to the presence of mucins.

8-Species of fungi stained with PAS

9-Staining protocol used at LABOPAVE.

RODRIGUES, João. Técnicas de Coloração – Laboratório Online. Disponível em: <https://www.fciencias.com/2014/06/26/tecnicas-de-coloracao/>. Acesso em: 27 nov. 2019.

FONTE: KUMAR, G.L. & KIERNAN, J.A. Education Guide: Special Stains and H&E. Ed 2. Carpinteria, 2010.

2- Intestino delgado, adenocarcinoma de células em anel de sinete, canino, macho, SRD, 13 anos 9 meses, HE. Nódulo na parede com grande quantidade de células epiteliais arranjadas em ácinos. Em meio às células neoplásicas há extensas áreas de proliferação de tecido conjuntivo (fibroplasia).

3- Intestino delgado, adenocarcinoma de células em anel de sinete, canino, macho, SRD, 13 anos 9 meses, HE. Nódulo na parede com grande quantidade de células epiteliais arranjadas em ácinos. Em meio às células neoplásicas há extensas áreas de proliferação de tecido conjuntivo (fibroplasia).

4- Intestino delgado, adenocarcinoma de células em anel de sinete, canino, macho, SRD, 13 anos 9 meses, HE. Observar os ácinos com células epiteliais contendo intenso pleomorfismo, núcleos vesiculosos com nucléolo evidente, variando de alongadas a poligonais com citoplasma escasso e eosinofílico, muitas apresentando grandes vacúolos que deslocam o núcleo para a periferia (célula em anel de sinete, seta vermelha).

5- Intestino delgado, adenocarcinoma de células em anel de sinete, canino, macho, SRD, 13 anos 9 meses, PAS. Em meio ao neoplasma há ácinos que contém restos celulares entremeados a material amorfo com áreas eosinofílicas e outras levemente basofílicas, positivas na coloração de PAS (mucinas).

6- Intestino delgado, adenocarcinoma de células em anel de sinete, canino, macho, SRD, 13 anos 9 meses, PAS. Em meio ao neoplasma há ácinos que contém restos celulares entremeados a material amorfo com áreas eosinofílicas e outras levemente basofílicas, positivas na coloração de PAS (mucinas).

7- Intestino delgado, canino, macho, SRD, 13 anos e 9 meses, PAS. Parte do órgão não acometida pelo neoplasma, evidenciando as vilosidades com as células caliciformes marcadas fortemente pelo PAS devido a presença de mucinas.

8-Espécies de fungos corados com PAS

9-Protocolo de coloração utilizado no LABOPAVE.

 Tricrômico Masson

O Tricrômico de Masson (TM) é uma coloração especial usada principalmente para caracterizar e discriminar diferentes tecidos conjuntivos e componentes de tecidos moles. Músculo liso e queratina são corados em rosa a vermelho, colágeno em azul ou verde, e fibras elásticas em preto. Quando o colágeno é corado em verde a coloração é chamada de Tricrômico de Masson modificado por Goldner. O ácido fosfotúngstico ou fosfomolibdico é usado junto com os corantes aniônicos para criar uma solução de coloração equilibrada. A coloração consiste em coloração sequencial com hematoxilina de ferro, que cora os núcleos de preto; Escarlate de Biebrich que cora de vermelho o citoplasma e azul de anilina ou verde claro de anilina que cora o colágeno de azul ou verde, respectivamente.Essa coloração é empregada para diferenciar leiomiomas e tumores neurais. Fibrose perivascular, formação de cicatriz e lesões escleróticas também são melhor apreciadas com o uso do tricrômico de Masson. 

English

Masson’s trichrome is a special stain which is typically used to characterize and discriminate between various connective and soft tissue components. Smooth muscle and keratin stain pink-red, collagen stains blue-green, and elastic fibers appear black. When the collagen turns green the stain it’s called Masson’s Trichrome modified by Goldner. Either phosphotungstic or phosphomolybdic acid is used along with anionic dyes to create a balanced staining solution. The stain consists of sequential staining with iron hematoxylin which stains nuclei black; Biebrich scarlet which stain cytoplasm red and aniline blue or aniline light green which stain collagen blue or green respectively. Masson’s trichrome stain is frequently employed when the histopathologic differential includes leiomyomatous and neural tumors. Perivascular fibrosis, scar formation, and sclerotic lesions are also better appreciated with the use of Masson’s trichrome. 

Esquema representando as cores que marcam os diferentes tecidos na coloração de Tricrômico de Masson.

Foto 1: Pele, hemangiossarcoma, formação de novos vasos de diversos tamanhos, hamster chinês, macho, 1 ano e 6 meses, 40X, HE.

Foto 2: Pele, hemangiossarcoma, formação de novos vasos de diversos tamanhos formados por células pavimentosas (endotélio) de elevado pleomorfismo, com núcleo fusiforme e citoplasma levemente eosinofílico. Há ninhos de células isoladas formando regiões sólidas apresentando núcleo variando de forma ovalada a estrelada e citoplasma indistinto, hamster chinês, macho, 1 ano e 6 meses, 400x, HE.

Foto 3: Pele., hemangiossarcoma, formação de novos vasos de diversos tamanhos formados por células pavimentosas (endotélio) de elevado pleomorfismo, com núcleo fusiforme e citoplasma levemente eosinofílico. Há ninhos de células isoladas formando regiões sólidas apresentando núcleo variando de forma ovalada a estrelada e citoplasma indistinto, hamster chinês, macho, 1 ano e 6 meses, 400x, HE.

Foto 4: Pele, hemangiossarcoma, formação de novos vasos de diversos tamanhos, hamster chinês, macho, 1 ano e 6 meses, 40X, Tricrômico de Masson.

Foto 5: Pele, hemangiossarcoma, observar as áreas sólidas de coloração azulada que representam o colágeno, hamster chinês, macho, 1 ano e 6 meses, 400x, Tricrômico de Masson.

Foto 7: Protocolo da coloração Tricrômico de Masson utilizada no LABOPAVE.

The name of the stain “Trichrome” suggests a stain made with 3 dyes and that gives rise to 3 colors for different tissues

Azul de toluidina

O azul de toluidina é um corante catiônico metacromático do grupo de tiazinas que marca seletivamente grupos ácidos de componentes teciduais (radicais carboxílicos, sulfatos e fosfatos), apresentando afinidade pelo DNA dos núcleos celulares e pelo RNA presente no citoplasma, os quais fixam o corante e coram-se profundamente. No laboratório de patologia veterinária essa coloração é utilizada prevalentemente para diferenciação de tumores de células redondas dentre eles o mastocitoma. O azul de toluidina é responsável por corar os grânulos metacromáticos dos mastócitos neoplásicos em azul.

English: Toluidine blue

Toluidine blue is a metachromatic cationic dye of the thiazine group that selectively marks acid groups of tissue components (carboxylic radicals, sulfates and phosphates), showing affinity for cell nucleus DNA and cytoplasmic RNA, which fix the dye and blush deeply. In the veterinary pathology laboratory this staining is used predominantly for differentiation of round cell tumors among them the mast cell. Toluidine blue is responsible for staining the eosinophilic metachromatic granules of neoplastic mast cells in blue.

CALANDRO, Terezinha Lisieux Lopes et al. Utilização do teste com o azul de toluidina como método auxiliar no diagnóstico de lesões orais. Revista Brasileira de Odontologia, Rio de Janeiro, v. 68, n. 2, p.196-199, jul. 2011.

Foto 1: Pele, mastocitoma de baixo grau, canino, fêmea, Shih-tzu, 10 anos e 11 meses, HE, 10x.

Foto 2: Pele, mastocitoma de baixo grau, canino, fêmea, Shih-tzu, 10 anos e 11 meses, HE, 40x.

Foto 3: Pele, mastocitoma de baixo grau, canino, fêmea, Shih-tzu, 10 anos e 11 meses, HE, 40x.

Foto 4: Pele, mastocitoma de baixo grau, canino, fêmea, Shih-tzu, 10 anos e 11 meses, Azul de Toluidina, 10x.

Foto 5: Pele, mastocitoma de baixo grau, observar os grânulos intracitoplasmáticos dos mastócitos corados de azul e infiltrado de eosinófilos e neutrófilos, canino, fêmea, Shih-tzu, 10 anos e 11 meses, Azul de Toluidina, 40x.

Foto 6: Pele, mastocitoma de baixo grau, observar os grânulos intracitoplasmáticos dos mastócitos corados de azul e infiltrado de eosinófilos e neutrófilos, canino, fêmea, Shih-tzu, 10 anos e 11 meses, Azul de Toluidina, 40x.

Foto 7: Protocolo da coloração de Azul de toluidina utilizado no LABOPAVE.

Warthin-Starry 

O Warthin-Starry (WS) é uma coloração de prata utilizada para identificação de espiroquetas. Dentre as espécies identificadas são exemplos Leptospira spp., Alipia feles, Bartonella henselae, Borrelia burgdorferi, H. pylori, Legionella pneumophila, Treponema allidum. Os microrganismos são corados em preto.  A coloração Warthin-Starry tem a desvantagem da coloração inespecífica das fibras elásticas do tecido, dificultando a interpretação das seções da pele. Uma interpretação complicada adicional é a coloração positiva dos melanócitos.

English

Warthin-Starry (WS) is a silver color used for identification of spirochetes. Among the species identified are Leptospira spp., Alipia feles, Bartonella henselae, Borrelia burgdorferi, H. pylori, Legionella pneumophila, Treponema pallidum. The microorganisms are stained black. Warthin-Starry staining has the disadvantage of nonspecific staining of elastic tissue fibers, making interpretation in the sections of the skin difficult. An additional complicated interpretation is the positive staining of melanocytes. 

FONTE: KUMAR, G.L. & KIERNAN, J.A. Education Guide: Special Stains and H&E. Ed 2. Carpinteria, 2010.

Estômago, congestão difusa moderada associada à espiroquetas, canino, macho, Yorkshire terrier, 3 anos e 9 meses, 10x, HE.

Estômago, congestão difusa moderada associada à espiroquetas, canino, macho, Yorkshire terrier, 3 anos e 9 meses, 40x, HE.

Estômago, congestão difusa moderada associada à espiroquetas (seta branca), canino, macho, Yorkshire terrier, 3 anos e 9 meses, 100x, WS.

Estômago, congestão difusa moderada associada à espiroquetas (setas brancas), canino, macho, Yorkshire terrier, 3 anos e 9 meses, 100x, WS.

Estômago, congestão difusa moderada associada à espiroquetas (setas azuis), canino, macho, Yorkshire terrier, 3 anos e 9 meses, 100x, WS.

Protocolo coloração de Warthin Starry LABOPAVE

Ainda em clima de Natal apresentamos a coloração de Picrosirius. 

Picrosirius é uma coloração seletiva de tecido conjuntivo que permite uma análise qualitativa das fibras colágenas do tecido conjuntivo. Quando observada sob luz polarizada, pela diferença na interferência de cores, na intensidade e na birrefringência dos tecidos corados, essa coloração permite a diferenciação principalmente das fibras tipo I e tipo III. O principal uso da coloração é na coloração e diferenciação dos diferentes tipos de colágeno, porém ela também tem sido utilizada para o diagnóstico diferencial de neoplasias fibrocísticas. Para observação do Picrosirius, é possível utilizar um simples filtro polarizante no caminho da luz. Uma dica é a utilização de óculos 3D. 

ENGLISH

Still in Christmas mood we present the coloring of Picrosirius.

Picrosirius is a selective connective tissue staining that allows a qualitative analysis of the collagen fibers of connective tissue. When observed under polarized light, due to the difference in color interference, intensity and birefringence of the stained tissues, this staining allows the differentiation mainly of type I and type III fibers. The main use of staining is in staining and differentiation of different types of collagen, but it has also been used for the differential diagnosis of fibrocystic neoplasms. For examination of the Picrosirius stain, it is possible to simply utilize a simple polarizing filter in the light path. One tip is the use of 3D glasses.

Fonte:

BEDOYA, S.A.O. et al. Caracterização de colágenos tipos I e III no estroma do carcinoma de células escamosas cutâneo em cães. Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., Belo Horizonte, v. 68, n. 1, p.1-4, set. 2015.

KUMAR, G.L. & KIERNAN, J.A. Education Guide: Special Stains and H&E. Ed 2. Carpinteria, 2010.

Pele, hemangiopericitoma, canino, macho, SRD, 11 anos e 7 meses, obj. 4x, HE.

Pele, hemangiopericitoma, canino, macho, SRD, 11 anos e 7 meses, obj. 10x HE.

Pele, hemangiopericitoma, canino, macho, SRD, 11 anos e 7 meses, obj. 40x, HE.

Pele, hemangiopericitoma, canino, macho, SRD, 11 anos e 7 meses, obj. 4x, Picrosirius.

Pele, hemangiopericitoma, canino, macho, SRD, 11 anos e 7 meses, obj. 10x, Picrosirius.

Pele, hemangiopericitoma, canino, macho, SRD, 11 anos e 7 meses, obj. 10x, Picrosirius.

Protocolo de coloração utilizado pelo Laboratório de Patologia Veterinária (LABOPAVE).

Alcian Blue ou Azul de Alciano

Os corantes de Alcian são compostos catiónicos e formam ligações eletrostáticas (iônica) com determinados grupos polianióicos carboxil ou sulfato. O Azul de Alcian (AA) tem grande especificidade em corar mucinas ácidas. Os tecidos não são afectados por posteriores tratamentos com água ou álcool e tem elevada durabilidade da coloração. Este corante cora específica e intensamente mucinas ácidas, de cor azul. Na patologia essa coloração é interessante para diferenciar certos tumores secretores de mucina ou com componentes mucinoides como carcinoma rico em lipídeos no pulmão, onde pode haver proliferação de células caliciformes secretoras de muco.

Alcian Blue

Alcian dyes are cationic compounds and form electrostatic bonds with certain carboxyl or sulfate polyanionic groups. Alcian Blue (AA) has great specificity in staining acid mucins. Alcian Blue (AA) has great specificity in staining acid mucins. The tissues are unaffected by subsequent water or alcohol treatments and have high color durability. This dye stains specifically and intensely acidic mucins, in blue color. In pathology this staining is interesting to differentiate certain mucin-secreting tumors or mucinoid-like tumors such as lipid-rich carcinoma in the lung, where there may be proliferation of mucus-secreting goblet cells.
FONTE:https://www.fciencias.com/2014/06/26/tecnicas-de-coloracao/. Acesso em 06/11

Intestino grosso, suíno, macho, Comercial, 40 dias, objetiva de 4x, HE.

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Protocolo de coloração utilizado pelo Laboratório de Patologia Veterinária (LABOPAVE).

Na patologia veterinária um dos métodos utilizados para diagnóstico confirmatório são as colorações especiais. Tendo isso em vista serão realizadas postagens mensais acerca das colorações utilizadas no LABOPAVE bem como sua finalidade e imagens ilustrativas. Esperamos que todos aproveitem e aprendam!